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MG63细胞

阅读次数:663  发布时间:2019/9/20 8:39:35
 摘 要
 
一、人成骨肉瘤MG-63细胞株和成人成骨细胞的培养与分化特性的观察
 
目的:观察人成骨肉瘤MG-63细胞株和正常成人成骨细胞分化的特性。方法:在细胞培养的不同时间,用α-磷酸奈酚法测定碱性磷酸酶(ALP)活性;放射免疫法测定骨钙素(BGP)含量;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测I型胶原、MMP-1、TIMP-1基因mRNA表达;Van GieSon氏苦味酸酸性复红染色法染色细胞I型胶原。结果:人成骨肉瘤MG-63细胞株接种培养第7天后I型胶原基因表达较高。
 
MMP-1表达量随时间推移逐渐增加,至第24天达到高峰。第1~9天TIMP-1 表达量逐渐增加,其后基本恒定。0~12天ALP活性逐渐增高,致12天达,其后逐渐下降。18天后,细胞有许多大小不等的结节形成,I型胶原结节染色较无结节处深。正常成人成骨细胞(hOB)接种培养后0~6天细胞逐渐汇片。0~12天ALP活性逐渐增高,致12天达,其后逐渐下降。第6天BGP表达,其后逐渐下降。结论:分离培养的hOB具有成骨细胞的特性;人成骨肉瘤MG-63细胞株为具有人成骨细胞表型特征的成骨细胞模型。人成骨肉瘤MG-63细胞株和hOB的生长分为细胞增殖、骨基质成熟、骨基质矿化阶段,且I型胶原、BGP、MMP-1、TIMP-1基因表达及ALP活性呈时间特异性。
 
二、人成骨肉瘤MG-63细胞株和成人成骨细胞基质金属蛋白酶及其抑制因子的表达
 
目的:观察人成骨肉瘤MG-63细胞株和正常成人成骨细胞(hOB)基质金属蛋白酶(MMPs)和基质金属蛋白酶抑制因子(TIMPs)表达的类型。方法:MMPs和TIMPs mRNA表达用RT-PCR检测。结果:人成骨肉瘤MG-63细胞株和hOB均表达MMP-1、MMP-2、MMP-7、MMP-10、MMP-11、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3。人成骨肉瘤MG-63细胞株可表达MMP-12,hOB则无。结论:人成骨肉瘤MG-63细胞株和hOB表达的MMPs和TIMPs类型基本相似,人成骨肉瘤MG-63细胞株可以作为具有人成骨细胞表型特征的成骨细胞模型来研究MMPs和TIMPs的表达与调控。
 
三、雌二醇对人成骨肉瘤MG-63细胞株和成人成骨细胞基质金属蛋白酶及其抑制因子的作用
 
目的:探讨雌二醇(17β-estradiol,E2)对人成骨肉瘤MG-63细胞株和正常成人成骨细胞(hOB)基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制因子(TIMPs)的作用和雌激素缺乏致骨质疏松的发病机制。方法:MMPs和TIMPs蛋白质表达用ELISA和Western Blot检测, mRNA用RT-PCR检测。MMPs活性用明胶酶谱法检测。
 
结果:首次发现E2抑制人成骨肉瘤MG-63细胞株MMP-1 mRNA和蛋白质表达,并且呈剂量依赖关系;10-8M E2抑制hOB MMP-1蛋白质表达;E2对人成骨肉瘤MG-63细胞株MMP-2及TIMP-1 mRNA及蛋白质表达无影响;E2对hOB MMP-2及TIMP-1 蛋白质表达无影响;E2对人成骨肉瘤MG-63细胞株和hOB MMP-2活性亦无影响。
 
结论:雌激素不足可导致其对人成骨样细胞MMP-1的抑制作用减弱,促进骨吸收和骨基质分解,此可能为雌激素缺乏致骨质疏松的重要发病机制。
 
四、雌二醇对人成骨肉瘤MG-63细胞株和成人成骨细胞膜型 基质金属蛋白酶-1的影响
 
目的:膜型基质金属蛋白酶-1(membrane type 1-matrix metalloproteinase, MT1-MMP)是*近发现的一种可由多种细胞表达的基质金属蛋白酶。为探讨雌二醇(E2)对人成骨肉瘤MG-63细胞株和正常成人成骨细胞(hOB)膜型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)的作用和绝经后骨质疏松症(OP)的作用机制。
 
方法:Northern杂交、Western杂交和激光共聚焦显微系统免疫荧光法分别检测MT1-MMP mRNA和蛋白质表达。MMP-2活性用明胶酶谱和酶联免疫吸附测定检测。结果 首次观察到E2促进MG-63细胞MT1-MMPmRNA表达,并呈剂量依赖关系。E2促进MG-63细胞MT1-MMP蛋白质表达,并呈剂量依赖关系;E2干预24~48小时促进MG-63细胞MT1-MMP蛋白质表达;激光共聚焦显微系统免疫荧光法证实E2促进MT1-MMP蛋白质表达增强,MT1-MMP蛋白质表达于细胞膜和细胞质中。E2对MG-63细胞MMP-2活性无影响。
 
结论:E2可促进MG-63细胞MT1-MMP表达。雌激素不足可减少成骨样细胞MT1-MMP表达,此可能为绝经后OP的骨吸收增强机理。
 

原创作者:上海雅吉生物科技有限公司

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