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技术文章详细
纯化DNA实验 |
阅读次数:2586 发布时间:2020/9/9 9:12:15 |
试剂、试剂盒 | 尾部缓冲液 蛋白酶 K | 仪器、耗材 | 离心管 玻璃棒 | 实验步骤 | 第 1 天 1. 大约 1.5 cm 长的尾部活检样品放在一个 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部缓冲液的小离心管中,加 35 ul 10 mg/ml 蛋白酶 K,在 55℃ 振摇温育过夜。 尾部缓冲液(配 25 ml) 50 mmol/L Tris,pH 8 1.25 ml 1 mol/L Tris,pH 8 100 mmol/L EDTA,pH8 5 ml 0.5 mol/L EDTA,pH 8 100 mmol/L NaCI 0.5 ml 5 mol/L NaCI 1% SDS 1.25 ml 20% SDS 存放于室温。 蛋白酶 K:10 mg/ml 水溶液,贮存于 -20℃。 第 2 天 2. 加 7 ul 10 mg/ml RNA 酶(不含 DNA 酶),在 37℃ 孵育 1~2 小时。 3. 在微量离心机中对样品离心 20 分钟以沉淀鼠毛。 4. 小心转移 0.5 ml 上清,注意不要搅动沉淀。 5. 在管子中加 0.5 ml 异丙醇并通过翻转轻轻地进行混合。应该立即有线状沉淀形成。 不要剧烈混合。不要使 DNA 形成紧密团块,否则会难以绕缠。 6. 在 Bunsen 灯的火焰上加热封闭 100 ul 玻璃小吸管的末端。 7. 把末端封闭的小吸管浸到 DNA 溶液中并剧烈搅拌来缠绕 DNA。一直搅动吸管直到 DNA 紧紧地缠绕到上面。 8. 洗 DNA 是在三个顺序排列的盛大约 50 ml 乙醇的烧杯中各浸 10 次(1 个是 70% 乙醇,另 2 个是 100% 乙醇)。洗 5~8 个样品后换洗涤溶液。 9. 用一片胶带标记玻棒末端,把它插在(DNA 端朝上)一块橡皮泥,使风干 10~15 分钟。 10. 用钻石记号笔在黏附了 DNA 的那一末端刻线,弄断玻棒,把带 DNA 的那段放到已作标记的微量离心管中。 11. 加 0.5 ml TE ( pH 8 )。样品在室温下振荡过夜。 第 3 天 12. 稍稍振荡管子,用干净镊子拿掉玻璃棒(在不同样品的操作之间烧一下镊子): 继续振摇 1~2 小时。(如果样品只是用来进行 PCR 分析,玻棒可以留在管子里)。 13. 以 1:10 稀释样品,测 OD260 值以确定浓度(1 OD260=50 ug/ml). 14. DNA 贮存在 4℃。 | 原创作者:上海雅吉生物科技有限公司 |
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