2. 使用变性裂解液提取的蛋白仍需和 loading buffer 混匀煮制样品。
3. 如果发现变性裂解液在低温下出现沉淀，在大于 37 度温度下孵育至沉淀复溶即可使用。
附加材料（自备）：
1 X PBS
板式离心机
操作步骤：
96 孔板贴壁细胞样品总蛋白提取
1. 将 96 孔离心管柱板放到 96 孔收集板上，将这个 96 孔离心管柱套板放在冰上预冷。
2. 96 孔贴壁细胞培养至 90-100%融合度，弃去培养基，每孔加入预冷的 PBS 清洗细胞一次，全弃去上清，
可以选用多道移液器操作。
3. 每孔中加入 25-40ul 裂解液，用多道移液器上下吹打混匀。将 96 孔离心管柱套板做好标记后，将细胞裂
解物依次转移到预冷的 96 孔离心管柱套板管中，使用封板膜将离心管柱板密封，将 96 孔离心管柱套板
放入平板式离心机中，4 度，4000rpm，离心 5min。
4. 离心后弃去 96 孔离心管柱板，接收管中即是提取好的总蛋白，样品可用 96 孔密封胶垫盖好冻存于-80 度
冰箱备用。再次使用将 96 孔收集板放于冰上解冻后，4000rpm，4 度，离心 5min，打开胶垫即可取用
蛋白样品。
非 96 孔板培养的细胞样品总蛋白提取
1. 将 96 孔离心管柱板放到收集板上，将这个 96 孔离心管柱套板放在冰上预冷。
2. 贴壁细胞：细胞培养至 90-100%融合度，弃去培养基，加入预冷的 PBS 清洗细胞一次，全弃去上清，
使用胰酶或细胞刮刀将细胞收集到 1.5ml 离心管中，4℃，700Xg 离心 5 分钟，全弃去上清。
非贴壁细胞：低速离心收集细胞，在 1.5ml 离心管中加入预冷的 PBS，500Xg，离心 2-3 分钟清洗细胞一
次，弃去部分上清，保留与细胞体积一致量的 PBS，涡旋震荡重悬细胞。
3. 根据细胞沉淀体积按表格 1 加入适量的裂解液，涡旋振荡混匀以裂解细胞。
请注意：如有部分未全裂解的细胞不会影响样品质量。
表格 1.不同细胞体积应加入相应体积裂解液
细胞沉淀（ul）
裂解液（ul）
3
20
5
50
10
100
20
200
40
500
注意：以上为通用参考，裂解液的实际量可以根据样品不同增加或减少
4. 将样品及 96 孔离心管柱套板对应做好标记后，依次将细胞裂解物转移到预冷的 96 孔离心管柱套板管
中，使用封板膜将离心管柱板密封，将 96 孔离心管柱套板放入平板式离心机中，4 度，4000rpm，离心
5min。
5. 离心后弃去 96 孔离心管柱板，接收管中即是提取好的总蛋白，样品可用 96 孔密封胶垫盖好冻存于-80
度冰箱备用。再次使用将 96 孔收集板放于冰上解冻后，4000rpm，4 度，离心 5min，打开胶垫即可取
用蛋白样品。
本品仅供研究使用，不可用于临床诊断
