大鼠 骨特异性碱性磷酸酶 B(ALP-B)酶联免疫 分析 试剂 盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围 ： ：： ： 96T 0.6µg/L -16µg/L 使用目的 ： ：： ： 本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中骨特异性碱性磷酸酶 B(ALP-B)含 量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠骨特异性碱性磷酸酶 B(ALP-B)水平。用纯 化的大鼠骨特异性碱性磷酸酶 B(ALP-B)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微 孔中依次加入骨特异性碱性磷酸酶 B(ALP-B)，再与 HRP 标记的骨特异性碱性磷酸酶 B(ALP-B)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样 品中的骨特异性碱性磷酸酶 B(ALP-B)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠骨特异性碱性磷酸酶 B(ALP-B)浓度。 试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶 2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（32µg/L） 0.5ml×1 瓶 3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份 5 显色剂 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个 标本 要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 16µg/L 5 号标准品 150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液 8µg/L 4 号标准品 150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 4µg/L 3 号标准品 150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 2µg/L 2 号标准品 150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 1µg/L 1 号标准品 150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl， 然后再加待测样品 10µl（样品终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。 4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 后弃去，如此 重复 5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。 7. 温育：操作同 3。 8. 洗涤：操作同 5。 9. 显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15 分钟. 10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。 操作程序总结 ： ：： ： 计算 以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值 大于标准品孔一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计 算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6 个月 原创作者：上海雅吉生物科技有限公司 |
