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葡萄糖含量检测试剂盒说明书

阅读次数:6870  发布时间:2021/9/26 13:58:13

葡萄糖含量检测试剂盒说明书

注意:正式测定务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

货号: YX-W-B601

规格: 100T/96S

产品内容:

葡萄糖含量检测试剂盒说明书

微量法


试剂一:葡萄糖 9mg×1支,4℃保存;临用加入1ml蒸馏水充分溶解为50μmol/mL 葡萄糖溶液, 用蒸馏水稀释为 0.5μmol/mL 葡萄糖溶液-20℃ 保存;

试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃保存; 试剂三:液体 10mL×1 瓶,4℃保存;

产品说明:

葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物,而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言,葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的能源,而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-

氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。

操作步骤:

一、 葡萄糖提取:

组织的处理:按照组织质量g:蒸馏水体积(mL) 15~10 的比例建议称取约 0.1g 组织, 加入 1mL 蒸馏水,研磨成匀浆,95℃水浴 10 分钟(盖紧,防止水分散失),冷却后,8000g 25℃离心 10min,取上清液备用。

细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量104 ): 蒸馏水体积mL 500~10001 的比例建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 蒸馏水,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3S,间隔 10S,重复 30 ),95℃水浴 10 分钟(盖紧,防止水分散失),冷却后,8000g25℃离心 10min,取上清液备用。

1分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 505nm,蒸馏水调零。

2混合试剂的配制:使用将试剂二和试剂三 1:1 等体积混合,用多少配多少。

3加样表(EP /96 孔板中加入下列试剂):

试剂(μL

空白管

标准管

测定管

样本

 

 

20

试剂一

 

20

 

蒸馏水

20

 

 

混合试剂

180

180

180

混匀,置37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴中,保温15min,于505nm 波长处读取


吸光度。空白管、标准管和测定管吸光值分别记为A1A2 A3。空白管和标准管只要做一管。三、 葡萄糖含量计算:

1、按样本蛋白浓度计算

葡萄糖含量(μmol/mg prot)=(C  标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)

=0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷Cpr

2、按样本鲜重计算

葡萄糖含量(μmol/g 鲜重)= (C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)

=0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W

3、按细菌或细胞密度计算

葡萄糖含量(μmol/ 104 cell)= (C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)

=0.001×(A3-A1)÷(A2-A1)

C 标准:标准管浓度,0.5μmol/mLV1:加入样本体积,0.1mLV2:加入提取液体积,1mL

Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本鲜重,g500:细菌或细胞总数,500万。注意:检测限为50nmol/g 鲜重或0.5nmol/mg prot葡萄糖含量检测试剂盒说明书

原创作者:上海雅吉生物科技有限公司

上海雅吉生物科技有限公司主营:ELISA试剂盒,免疫组化试剂盒,PCR检测盒,金标试纸,发光试剂盒,抗体,血清,细胞等
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