布鲁氏菌cELISA抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

使用说明书

【产品名称】

通用名：布鲁氏菌cELISA抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：cELISA Kit for Detection of Brucella Antibody

【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【预期用途】 布鲁氏菌病是由布鲁氏菌（Brucella）引起的人、畜共患传染病，其特征是生殖器官和胎膜炎，引起流产、不育和各种组织的局部病灶。

本试剂用于检测牛、羊血清中布鲁氏杆菌抗体，可用于布鲁氏菌疫苗免疫效果评价或该病的辅助诊断。

【原    理】

    本试剂盒由预包被布鲁氏菌抗原的酶标板、酶标记物、抗体工作液及其他配套试剂组成，应用竞争酶联免疫法（ELISA）原理检测牛羊血清、血浆样本中布鲁氏菌抗体。实验时在酶标板中加入待检样本及酶标记物、抗体工作液，经温育后若样品中含有布鲁氏菌抗体，则将与抗体工作液竞争结合酶标板上抗原，酶标记物与抗体工作液及酶标板上抗原形成复合结合物；再经洗涤除去未结合的其他成分，在孔中加TMB底物液，若样品中含有布鲁氏菌抗体则将阻断酶标记物、抗体工作液与酶标板上抗原结合，从而使后续反应不出现显色；反之则出现显色；显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有布鲁氏菌抗体。

【试剂盒组成】

【储存及有效期】 2～8℃保存，有效期12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮，使用期限为2个月。

【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

【样品准备】

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，期需置-20℃保存。

2.浓缩洗涤液使用应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。

3.用工作洗涤液将待检牛血清先按10倍稀释（如10μl血清加入90μl工作洗涤液中，混匀），待检羊血清按25倍稀释（如4μl血清加入96μl工作洗涤液中，混匀），阴、阳性对照不用稀释。

【检验方法】

1.使用将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl；样品孔每孔先加入稀释后的血清样品50μl。

然后每孔依次加入50μl酶标记物、50ul抗体工作液。

4.混匀，盖好盖板膜，置37℃（推荐水浴）避光反应45分钟。

5.甩去孔内液体，每孔加350μl工作洗涤液，静置30后弃去，重复洗涤5次，后一次拍干。

6.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃避光反应15分钟。

7.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。

【参考值】实验正常的情况下，阴性对照吸光值≥1.0，阳性对照吸光值≤阴性对照吸光值×50%。

【检验结果的解释】

1. PI（阻断率）=（1- 阴性对照平均A值(样本A值)）×100%，PI≥50%为阳性；PI＜50%为阴性。

2. 本实验结果为阳性时表明动物样本含有布鲁氏菌抗体，需结合临床及其他方法进行分析。

【试验方法的局限性】

本检测结果仅供筛查，不作为确诊依据。

【注意事项】

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以全溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。

原创作者：上海雅吉生物科技有限公司