山羊传染性胸膜肺炎(pleuropneumonia)ELISA试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 使用目的: 本试剂盒用于定性测定山羊血清,血浆及相关液体样本中传染性胸膜肺炎(pleuropneumonia)。 实验原理 本试剂盒采用间接法测定标本中山羊传染性胸膜肺炎(pleuropneumonia)。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,与样品中传染性胸膜肺炎(pleuropneumonia)温育后,加入生物素标记的抗IgG抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,经过彻洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中山羊传染性胸膜肺炎(pleuropneumonia)的存在与否。, 试剂盒组成 1 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 8 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 2 | 链霉亲和素-HRP | 6ml×1瓶 | 9 | 阴性对照 | 0.5ml×1瓶 | 3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 10 | 阳性对照 | 0.5ml×1瓶 | 4 | 生物素标记的抗-IgG抗体 | 6ml×1瓶 | 11 | 密封袋 | 1个 | 5 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 12 | 封板膜 | 3张 | 6 | 显色剂B液 | 6ml×1/瓶 | 13 | 说明书 | 1份 | 7 | 终止液 | 6ml×1瓶 | | | | 标本要求 1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 操作步骤 1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔 2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,37℃温育45分钟。 3. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30后弃去,如此重复4次,拍干。 5. 加生物素标记的抗-IgG抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl。37℃温育30分钟 6. 洗涤:操作同4。 7. 加链霉亲和素-HRP:每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。 8. 洗涤:操作同4。 9. 显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 结果判定: 试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.20 临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15 阴性判定:样品OD值< 临界值(CUT OFF)者为传染性胸膜肺炎(pleuropneumonia)阴性 阳性判定:样品OD值≥ 临界值(CUT OFF)者为传染性胸膜肺炎(pleuropneumonia)阳性 注意事项 1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。 2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 5.底物请避光保存。 6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm 7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。 规格: 96人份/盒 保存条件及有效期 1.试剂盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6个月 原创作者:上海雅吉生物科技有限公司 |