植物α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）试剂盒

                                                                    酶标法 100管/48样

测定意义：

淀粉酶负责水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。

测定原理：

还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。β-淀粉酶不耐热，在70℃钝化15min，从而测定α-淀粉酶活性。

需自备的仪器和用品：

酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、酶标板、研钵和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：25mL×1瓶，常温保存，若有黄色晶体析出，需加热溶解后再用；

试剂二：20mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

称取约0.05g样本，加0.4mL蒸馏水匀浆；匀浆后在室温下放置提取15min，每隔5min振荡1次，使其充分提取；3000g，常温离心10min，吸取上清液并且加蒸馏水定容至5 mL，摇匀，即为淀粉酶原液。

操作步骤和加样表： 

1、β-淀粉酶灭活：

70℃水浴15min左右，冷却。

2、加入试剂一并且保温：

将以上对照管、测定管和试剂二置于40℃恒温水浴中保温10min左右

3、准确反应5min

在40℃恒温水浴中准确保温5min

4、加入试剂一，并且混匀

混匀，室温静置10min，取200μL至酶标板中，540nm处读取对照管和测定管吸光度，计算ΔA=A测定管-A对照管。

α-淀粉酶活性计算：

1、标准条件下测定回归曲线为y=0.04475x -0.022； x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

2、α淀粉酶活性

（1）按照样品质量计算

单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

α淀粉酶活性(U/g鲜重)=(ΔA＋0.022)÷0.04475÷(W÷V样总)÷T=22.3×(ΔA＋0.022)÷W

（2）按照蛋白质含量计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。

α淀粉酶活性（U/mg prot）＝(ΔA＋0.022)÷0.04475÷Cpr÷T =2.23×(ΔA＋0.022) ÷Cpr 

V样总：提取液总体积，5 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，5min。

原创作者：上海雅吉生物科技有限公司