植物β-淀粉酶（β-amylase，β-AL）试剂盒

植物β-淀粉酶（β-amylase，β-AL）试剂盒说明书

                                                                   酶标法 100管/48样

测定意义：

淀粉酶负责水解淀粉，主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。

测定原理：

还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉酶不耐酸，β-淀粉酶不耐热。根据上述特性，钝化其中，就可测出另一种淀粉酶的活力。

需自备的仪器和用品：

酶标仪、恒温水浴锅、离心机、可调式移液器、酶标板、研钵和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：50mL×1瓶，常温保存，若有黄色晶体析出，需加热溶解后再用；

试剂二：40mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

称取约0.05g样本，加入0.4mL蒸馏水，研磨匀浆；将匀浆倒入离心管中，提取液在室温下放置提取15min，每5min振荡1次，使其充分提取；3000g，常温离心10min，取上清液加蒸馏水定容至5 mL，摇匀，即淀粉酶原液。

吸取上述淀粉酶原液0.5mL，加入2mL双蒸水，摇匀，即为淀粉酶稀释液，用于（α＋β）淀粉酶总活力的测定。

测定步骤和操作表：

70℃水浴15min左右，冷却

将以上对照管、测定管和试剂二置于40℃恒温水浴中保温10min左右

在40℃恒温水浴中准确保温5min

混匀，室温静置10min，在540nm下测定吸光度，从左到右分别记为A1、A2、A3和A4。

酶活性计算：

1、标准条件下测定回归曲线为y=0.04475x - 0.022； x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

2、α淀粉酶活性计算

（1）按照样品质量计算

单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

α淀粉酶活性(U/g鲜重)=(A2-A1＋0.022)÷0.04475÷(W÷V样总)÷T=22.3×(A2-A1＋0.022)÷W

（2）按照蛋白质含量计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。

α淀粉酶活性(U/mg prot)=(A2-A1＋0.022)÷0.04475÷Cpr÷T=2.23×(A2-A1＋0.022) ÷Cpr

3、总淀粉酶活性计算

（1）按照样品质量计算

单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

总淀粉酶活性(U/g鲜重)=5×(A4-A3+0.022)÷0.04475÷(W÷V样总)÷T=112×(A4-A3+0.022)÷W

（2）按照蛋白质含量计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

总淀粉酶活性(U/mg prot)=5×(A4-A3+0.022)÷0.04475÷Cpr÷T=11.2×(A4-A3＋0.022)÷Cpr

4、β-淀粉酶活性计算

（1）按照样品质量计算

单位定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

β-淀粉酶活性(U/g鲜重)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=[112×(A4-A3＋0.022)-22.3×(A2-A1＋0.022)]÷W

（2）按照蛋白质含量计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

β-淀粉酶活性（U/mg prot）=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=[11.2×(A4-A3＋0.022)-2.23×(A2-A1＋0.022)]÷Cpr

5：总淀粉酶稀释倍数；V样总：提取液总体积，5 mL； W：样品质量，g；T：反应时间，5min。

原创作者：上海雅吉生物科技有限公司