赖氨酸(lysine,Lys)含量测定试剂盒说明书 分光光度法 50管/48样 注 意 : 正式测定务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义: 赖氨酸是人体必需氨基酸,能促进人体发育、增强免疫功能,并有提高中枢神经组织功能的作用。赖氨酸为碱性必需氨基酸。由于谷物食品中的赖氨酸含量甚低,且在加工过程中易被破坏而缺乏,故称为一限制性氨基酸。 测定原理: 蛋白质中的赖氨酸具有一个游离的ε-NH2,它与茚三酮试剂反应生成蓝紫色物质,其颜色的深浅在一定范围内与赖氨酸的含量成线性关系。亮氨酸与赖氨酸的碳原子数目相同,而且仅有—个游离氨基(ε-NH2),所以通常用亮氨酸配制标准液。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水、水浴锅。 试剂的组成和配制: 提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存; 试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存;临用加入12.5mL试剂三充分溶解混匀; 试剂二:液体12.5mL×1瓶,4℃保存; 试剂三:液体15mL×1瓶,4℃保存; 试剂四:60%乙醇,自备。 赖氨酸提取: 样本烘干粉碎,称取约0.01g样本,加入1mL提取液,充分匀浆。80℃水浴提取20min,冷却后10000g离心10min,取上清待测。 测定步骤 1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至570nm,蒸馏水调零。 2、 工作液的配制:取10mL试剂一与10mL试剂二混合摇匀,取上清备用。用不完的试剂4℃保存。 3、 在有盖EP管中加入下列试剂: 试剂名称(μL) | 测定管 | 空白管 | 样本 | 200 | | 提取液 | | 200 | 工作液 | 400 | 400 | 混匀,80℃水浴30min(盖紧,以防止水分散失),冷却至常温。 混匀,取1000μL至1mL玻璃比色皿中,于530nm波长处记录吸光值A。△A=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。 赖氨酸含量计算: 标准条件下测定回归方程为y = 0.0062x - 0.0212;x为赖氨酸含量(µg/mL),y为吸光值。 1. 按照蛋白浓度计算 赖氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515 =185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr 2.按照样本质量计算 赖氨酸含量(µg/g干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515 =185.73×(△A+0.0212) ÷W V1:加入反应体系中样本体积,0.2mL;V2:加入提取液体积,1 mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;1.1515,校正系数。 原创作者:上海雅吉生物科技有限公司 |