注意：正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。研究意义：

微量法100T/96S

测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。

测定原理：

DPPH·为稳定的自由基 ，溶于甲醇，乙醇等性溶剂中，在 515nm 处有大吸收。向DPPH·溶液中加入抗氧化剂时，会发生脱色反应，因此可用吸光度的变化并以 Trolox 作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。

自备实验用品：

恒温水浴锅、低温离心机、酶标仪、96 孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 120mL×1 瓶，使用预冷。试剂一：液体 45mL×1  瓶，避光保存。

样品的制备：

(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品

血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA  抗凝）4℃，5000rpm  离心

10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过

30 d）后再测定。

(2) 组织样品

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL

提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

(3) 细胞样品

按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入

1mL 提取液），冰浴超声波破碎（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g，

4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

操作步骤：

1、 酶标仪预热 30min，调节波长至 515nm。

2、操作表（在 EP 管中反应）

注意：空白管只需测定一次，若A 测定小于 0.2，需用提取液稀释后检测。