单细胞分离试剂盒 (非无菌) 描述: 单细胞分离试剂盒由优化的组织裂解缓冲液和特制的 2.0ml 离心管柱组成。可以快速的 从新鲜动物组织中分离出单细胞,也可用于从甲醛固定的组织中分离细胞核,用于染色体免疫沉淀(ChIP) 。 组织裂解缓冲液适用于大多数动物组织。缓冲液中不含任何蛋白酶和 EDTA,对细胞表面标记物检测无不良 影响。由于使用带孔径的离心管柱技术和特殊的缓冲体系,可从新鲜组织中快速效分离单细胞悬浮液,操 作时间小于 10 分钟, 产量高。 本试剂盒特别适用于淋巴组织如脾脏、胸腺和淋巴结,其他组织样品分离效果 因组织差异而不同 。如果是冷冻或者其他新鲜组织样品推荐使用 进行单细胞分离。. 应用: 分离的单细胞和细胞核可用于 FACS 分析和染色体免疫共沉淀(ChIP) 。单细胞悬浮液也可用于分离/纯 化 DNA ,RNA ,蛋白和其他细胞组份。
试剂盒组分 50T: 1. 25ml Buffer A (用于非固定组织) 2. 25ml Buffer B (用于甲醛固定组织) 3. 50 个离心管柱 4. 50 个收集管 5. 2 根塑料研磨棒 4T: 1. 2.0 ml Buffer A (用于非固定组织) 2. 2.0ml Buffer B (用于甲醛固定组织) 3. 4 个离心管柱 4. 4 个收集管 5. 1 根塑料研磨
储存: 常温运输 ,4℃储存。 所需附加材料 台式离心机 1X PBS 或 FACS 缓冲液 (1XPBS 加入 5%FBS 或 BSA) 胎牛血清 (从非固定组织分离单细胞需要) 1.25M 甘氨酸(从固定组织分离细胞核需要) 37%甲醛(从固定组织分离细胞核需要) 缓冲液的选择: 从新鲜组织中分离单细胞使用 Buffer A。 从甲醛固定的组织中分离使用 Buffer B (固定时间应小于 20 分钟) 。 操作方法: 从新鲜组织(10-40mg)中分离单细胞,试剂盒可以完成 50 次样品分离。 1. 使用在 Buffer A 中加入胎牛血清(实验室自备), 按每 1ml Buffer A 中加入 100ul 胎牛血清为比例 。将缓冲液 A 和离心管柱套管在冰上预冷。 2. 将组织放入离心管柱套管中,加入 100ul 预冷的Buffer A 到管中,用提供的塑料研磨棒向下按压反复扭转研磨组织 50-60 次 。(注意: 塑料研磨棒是可重复使用的。用蒸馏水底冲洗干 净,用纸巾擦干) 3. 再加入 400ul Buffer A 到离心管柱中,盖上盖子,翻转几次, 1,200Xg,离心 2-3 分钟。 4. 弃掉离心管柱, 涡旋震荡重悬沉淀, 400Xg,离心 5 分钟。弃掉上清液, 沉淀为单细胞沉淀, 可用含有 10-20%BSA 的预冷组织培养基, FACS 缓冲液或其他缓冲液重悬沉淀为细胞悬液。 从甲醛固定组织中分离细胞核用ChIP 实验,本试剂盒可以完成 25 次样品分离。 1. 将 Buffer B 和离心管柱套管在冰上预冷。 2. 称取冷冻或新鲜组织 10-40mg ,用锋利刀片把组织切成小片(1-3 立方毫米)。 3. 将切好的组织放入离心管柱套管中 (标记为离心管套管 A), 加入 0.5ml 预冷的 PBS 和 14ul 37%甲醛到离心管柱中,盖上盖子,翻转几次,室温下孵育 15 分钟,每 5 分钟翻转几次管 子。 4. 加入 50ul 的 1.25 M 甘氨酸到离心管柱套管中,盖上盖子,翻转几次,室温下孵育 5 分钟。孵育后, 2,000Xg,离心 10 钟,用 0.5ml PBS 清洗组织一次。弃去接收液。 5. 加入 100ul 预冷的 Buffer B 到离心管柱上,用提供的塑料研磨棒按压反复扭转研磨组织 50-60 次(注意:塑料研磨棒是可重复使用的。用蒸馏底冲洗干净,用纸巾擦干)。再加入 400ul Buffer B 到离心管柱套管中,冰上孵育 2-3 分钟, 让较大的未破碎的组织碎片沉下来。 6. 小心的从离心管套管 A 中转移 400ul 上清液到一个新的离心管柱套管中 (标记为离心管柱B)。加入 300ul Buffer B 到离心管 A 中。盖上离心管柱 A 和 B,翻转几次, 2,000Xg,离心 4-5 分钟。 (可选优化: 从接收管中将上清液转移回离心管柱上, 与残留组织匀浆混合, 2,000Xg, 离心 4-5 分钟可以进一步增加产量)。 7. 弃掉 A 和 B 离心管柱, 涡旋震荡重悬沉淀后, 1,200Xg,离心 4-5 分钟。离心后, 弃掉上清,根据下游应用选择合适的缓冲液重悬沉淀(A 和 B 管中沉淀是分离的细胞核)。得到的细胞 核可以用于 ChIP 检测。 原创作者:上海雅吉生物科技有限公司 |