规格:50 管/24 样 植物脱氢酶(Plant dehydrogenase, pDHA) 试剂盒说明书 可见分光光度法 注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。 测定意义 生物体的脱氢酶(Plant dehydrogenase , DHA)的活性在很大程度上反映了生物体的活性 状态,能直接表示生物细胞对其基质降解能力的强弱。 测定原理 受氢体 2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride,即 TTC) 在细胞呼吸过程中接受氢以后,其还原产物三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone,即 TF)呈现 红色,在波长 485nm 处有吸收峰,测定其 485nm 吸光值,即得植物脱氢酶活性。 恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、研钵、滤纸、可见分光光度计、1mL 比色皿、冰、蒸 馏水和乙酸乙酯(不允许快递,请用户自备)。 试剂的组成和配制 试剂一:粉剂×2 瓶,使用前加少量水溶解,定容至 60mL,避光、4℃保存(尽量现配现 用)。 试剂二:液体 60mL×6,4℃保存。 试剂三:乙酸乙酯,自备。 样品处理 称取 0.5-1g 的植物组织,用双蒸水清洗 3-4 次,用滤纸吸干水分,备用。 测定步骤和操作表 对照管 测定管 样品(g) 0.5-1 0.5-1 试剂一(mL) 5 试剂二(mL) 10 5 充分混匀,37℃,暗培养 3h,取出后立即冰浴 5min,过滤,去滤液,尽量用滤纸吸干样品, 置于研钵中。 试剂三(mL) 5 5 充分研磨,吸取红色液体于离心管中,用少量试剂三冲洗研钵,一起加入离心管,用试剂三 定容至 15mL,10000rpm/min,4℃,离心 5min,取上清,于 1cm 光径,蒸馏水调零,测定 OD485 。 脱氢酶活力计算 酶活单位定义:在 37℃时,每小时每克样品使反应体系 OD 值每增加 0.01 为一个酶活单位。 计算公式:脱氢酶活性(U/g·h)=(OD485 测定-OD485 对照)÷0.01 ÷样品质量(g) ÷反应时间(h) 注意事项 1. 配制好的试剂一避光保存于 4℃,尽量在一周内使用,若出现红色,则不能使用。 2. 试剂三易挥发,有毒,为了您的健康,请穿实验服,戴口罩,戴乳胶手套操作。 3. 反应完成后立即冰浴以终止反应,并去除干净残留的反应液。 4. 如果测定出来的吸光值较大,需把样品适当稀释再进行测定。 5. 试剂盒 2-8℃保存 |