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实验室常用火菌方式介绍及应用 |
阅读次数:758 发布时间:2021/1/5 9:29:18 |
、干热灭菌 常用于耐热器皿的灭菌,如移液管、玻璃平血、玻璃试管或金属器皿等,可在170℃灭菌2-4h或200℃灭菌0.5-1h。接种 环、接种针、涂布棒等实验器材可在酒精灯上直接进行灼烧灭菌。 火菌效果:火菌效果强,可杀灭包括芽孢在内的所有微生物。 注意事项: 1.干热灭菌过程的热穿透效果差且比较慢,因此在烘箱内进行干热灭菌时,不可摆放过满; 2塑料、橡胶等不耐热材质不可采用此方法灭菌﹔ 3.纸张、棉花灭菌温度不能超过170℃;制备好的培养基不可采用此方法灭菌。 二、高压蒸汽灭菌(湿热火菌〉 常用于实验室多数培养基灭菌,也可用于玻璃器皿、金属器皿的灭菌。般采用121℃高压灭菌15-2Omin或116℃高压灭 菌30min,根据培养基不同可对灭菌参数进行调整。 灭菌效果:可杀灭包括芽孢在内的所有微生物。 注意事项: 1.灭菌锅效力不达标、灭菌过程冷空气未排净、培养基本身含芽孢过多、灭菌方式不正确、灭菌锅内物品摆放过满都有 可能导致灭菌失败; 2.在进行容器灭菌时,容器不可密封,需与灭菌锅内空气流通。 三、水浴/加热/流动蒸汽灭菌 常用于含不耐热成分的培养基灭菌,如D琼脂、亚西酸盐胱氨酸增菌液、亚硫酸铋琼脂等。采用流动蒸汽方式灭菌的 培养基,如没有相应的流动蒸汽灭菌设备,可采用水浴加热方式或“蒸”的方式灭菌。 灭菌效果:可杀灭微生物繁殖体,不能杀灭芽孢体,采用此类方式灭菌的培养基通常具有强抑菌性,或要求短时间内使 用。 注意事项: 1.不同培养基成分耐热性有差别,加热时应当注意,如含亚西酸盐的培养基(SC、SBC等)加热至90℃左右即可,加热 过度会使亚西酸氡钠分解,培养基变红,含琼脂的培养基可加热煮沸4-6次或沸水浴20-30min使琼脂完全溶解即可; ⒉.采用加热灭菌方式的培养基,通常含有不稳定成分,建议现配现用或按标准规定的期限使用,如不立即使用,可置于 低温或阴凉(2-8℃或10-20℃)处避光保存。 四、过滤除菌 常用于抗生素或含不耐热成分培养基的灭菌,般使用0.22um孔径的微孔滤膜或滤芯进行过滤除菌。实验室制取无菌 空气也可采用此方法,使用特殊滤芯或滤网对空气进行过滤除菌。 灭菌效果:可除去普通细菌、真菌及芽孢体,但不能除去支原体、病毒等体积微小生物。 注意事项: 1.使用通常需按照说明书使滤膜或滤芯浸湿; ⒉.注意过滤速度和体积,需严格按照过滤器或滤膜说明使用,速度过快或过滤体积超标都有可能导致滤膜破损,除菌失 败﹔ 3.黏度较大或有沉淀的培养基不适合用此方式除菌。 五、辐照灭菌 微波、紫外线、x射线和个射线等均可用于灭菌。Y射线穿透力强,灭菌效果好,被广泛应用于食品、药品行业产品灭 菌,也常用于微生物培养基、实验器材灭菌。些特殊培养基或添加剂成分因不适合高温蒸汽灭菌、过滤除菌等方法,可 采用Y射线辐照灭菌。紫外线杀菌效果较弱,几乎没有穿透力,通常仅用于实验室空气或物体表面杀菌。 灭菌效果:射线灭菌效果好,穿透力强,可杀死包括芽孢体在内的所有微生物。 注意事项: 1.并非所有培养基都可以采用Y射线辐照灭菌方式,些染料或不稳定成分经辐照后会发生变化; 2.Y射线会对琼脂造成定程度破坏,因此在进行固体培养基灭菌时,需对辐照剂量和琼脂添加量进行适当调整; 3.玻璃制品、金属制品般不可采用此方法灭菌。 六、化学试剂灭菌 常用环氧乙完灭菌,以及各类消毒剂浸泡灭菌。环氧乙完曾广泛用于平皿、次性医疗产品的灭菌,但由于对环境污染 较大,灭过菌的产品需长时间放置使环氧乙完消散,现已逐步被其他灭菌方式取代。 灭菌效果:不同消毒剂杀灭效果存在差异,大致上可分为低效消毒剂、中效消毒剂和高效消毒剂。环氧乙完属于高效消 毒剂,可杀灭包含芽孢在内的所有微生物。 注意事项: 1.此类灭菌方式通常会有残留,且对环境有污染,因此般不适合用于直接进行微生物培养相关器皿灭菌; ⒉杀菌能力越强的消毒剂,刺激性、腐蚀性、毒性往往越大,使用时需注意防护。
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