常见实验问题1. M与mol/l的换算关系？
M即mol/l，mM即mmol/l，μM即μmol/l，nM即nmol/l，pM即pmol/l，fM即fmol/l。 1M=103mM=106μM=109nM=1012pM=1015fM 2. 冻存试剂或样品可以室温或37℃水浴解冻吗？
冻存试剂或样品的解冻，如果时间比较充裕，建议在冰浴或冰水浴上缓慢解冻。如果时间比较着急，大多数冻存的试剂或样品是可以在室温或37℃水浴解冻（例如抗生素些产品不建议客户37度水浴），但都必须特别小心，必须边观察、边轻轻晃动、边融解。待部分溶解后即需从水浴中取出，确保溶解过程中试剂或样品还是接近0℃的。如果该试剂或样品在0℃不会结冻，解冻后可以置于冰浴或冰水浴。 3. 离心力(×g)和每分钟转速(rpm)如何换算？
转速有离心力(×g)和每分钟转速(rpm)两种表示方式，有些离心机设置有rpm和xg显示，但普通离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算： g=r×11.18×10-6×rpm2 (r 为有效离心半径，即从离心机轴心到样品中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000rpm，有效离心半径为10 cm，则离心力=10×11.18×10-6×30002=1006.2(×g)。 4. 微量液体试剂如何量取？
(1)在开启装有微量试剂的离心管之，宜先适当离心(500-2000rpm离心5即可)。这步很重要，目的是将因运输颠倒而粘于管壁和盖子上的试剂收集至管底以供使用。
(2)微量液体样品宜尽量减少量取次数，以减少不必要的损耗。每多量取次会损耗0.5-数微升不等的试剂，例如总体积为100μl的试剂，每次量取5μl，通常不太可能量取20次的。
(3)事先计算好样本数量和试剂使用量，次性量取配制出定量的工作液后，再分装至各反应管之中。这样可以减少试剂量取的次数。 (4)好使用经校验的、精密度高、合适量程的微管移液枪及枪头，否则会有超乎想像的误差和损耗。如果是连续量取，每次量取都宜更换枪头，否则会导致第次吸取后每次的吸取体积明显偏大。
(5)移液枪吸取操作时，宜垂直进入液面数毫米。枪头通常不宜直接插入管底，略低于液面即可，避免试剂过多粘于枪头造成损耗。慢吸，缓慢松开控制按钮，否则液体进入吸头过速会导致少量液体倒吸入移液器内部，导致终打出时的体积减少。
(6)打出液体时枪头贴壁并有定角度，慢放，即缓慢打出液体。 5. 微量对于微量粉末试剂如何操作及使用？
(1)在开启装有微量试剂的离心管之，宜先适当离心(500-2000rpm离心5即可)。这步很重要，目的是将因运输颠倒而粘于管壁和盖子上的试剂收集至管底以供使用。
(2)对于10mg或以下的微量固体样品，通常不建议再使用天平进行称量，而宜直接按照产品标签上标示的量进行溶液的配制。例如5mg的粉末试剂，很多时候很难从离心管中全部取出来的，但可以在该离心管内全部配制成适当的溶液。对于量略多些的微量粉末样品，也宜尽量减少称量次数，通常建议每次称量的重量不少于10mg。多次微量的称量可能会由于称量误差导致每次的检测结果产生偏差。对于微量的粉末，如果不涉及溶液保存的稳定性方面的问题，通常建议次性将所有的粉末试剂按标注的剂量配制完毕。
(3)如果需要称量，请注意使用灵敏度较高的分析天平，使用进行校准。另外，称量时不建议带乳胶手套（可以戴次性薄膜手套），以防止乳胶手套和称量纸之间产生的静电影响称量的准确性。称量20-30mg或更小重量时，不可以戴乳胶手套。我们测试过的多种乳胶手套(包括某些品牌的进口乳胶手套)，在用乳胶手套接触(摩擦)称量纸后会产生静电，从而会影响称量的准确性，误差可以达到数毫克。而使用聚乙烯材质的薄膜手套，即所谓的PE薄膜手套(类似于保鲜膜材质)，接触称量纸则不会产生静电，此时误差较小。 6. 试剂或试剂盒存放时搞错保存温度，是否会影响其使用效果或是否能继续使用？
对于很多试剂虽然要求低温保存，但这是长期保存的条件，很多时候是完全可以在4℃甚至室温短时间保存的。对于具体的某种试剂或试剂盒是否可以继续使用，请设置标准品或阳性对照进行检测，如果标准品或阳性对照的检测结果正常即可继续使用。 7. 试剂已经变色是否还能用？
不能用。试剂变色通常由于试剂的不稳定引起，变色很多时候表明试剂已经变质。对于需要低温或避光保存的试剂定要低温或避光保存。 生化试剂盒常见咨询问题1. 生化试剂盒的测定原理？
生化试剂盒通过化学反应/酶促反应或物质结构特点测定样本中物质含量或酶活；所用仪器般为分光光度计和酶标仪，两者的测定原理都是朗伯比耳定律: A=kbc，即当适当波长的束平行单色光照射固定浓度均匀溶液时，其吸光度与光通过的液层厚度成正比。土壤、水质、动植物组织、血清、细胞细菌、食品等样本均可以进行测定。 2. 如何选择不同规格的试剂盒？
（先根据本实验的实际情况选择，实验室有酶标仪的且有该检测波长的可以选择微量法试剂盒；实验室有分光光度计的，且有相应规格的比色皿既可以选择常量法也可选择微量法试剂盒。建议购买先阅读官网的说明书，对其中自备的仪器和试剂进行确认。 3. 收到试剂盒后如何保存？
如果收到试剂盒，暂时不用，可按照外包装上指示的温度统保存；拆开包装后，请按照每个试剂的保存温度进行保存，有些试剂忌反复冻融；有些试剂为粉剂，溶解之后性质不稳定。 4. 试剂盒的有效期是多长？
通常对于转染效率非常高的细胞，我们建议用没有TA promoter的质粒；对于转染效率比较低的细胞，我们建议使用带有TA promoter的质粒。带有TA promoter的质粒，由于多了段启动子，本底性的表达就会比较高，在转染效率比较低的情况下也比较容易检测到。而没有TA promoter的质粒，本底性表达相对比较低，如果转染效率比较低，就很可能检测起来有困难。但对于转染效率比较高的细胞，由于没有TA promoter的质粒的本底比较低，有时更容易观察到报告基因的变化或差异。具体选用何种质粒效果更好，还要视具体的实验条件而定。 5. 收到试剂盒后应该从哪步做起？
强烈建议客户先拿出2-3个预期结果差别较大的样本做预实验。在实验的过程中，先将试剂盒中的说明书通读遍，检查试剂盒中各成分的量与说明书符不符合，溶解或使部分试剂回复至室温，然后处理样本，样本提取完成后，再溶解些粉剂，开始实验。 5. 试剂盒中含有干粉的试剂应该怎么稀释保存？
般试剂为粉剂的，可能更多的考虑到配成溶液后的稳定性差，如NADH，或者和其他试剂溶解在起会在不同的温度下有其他的化学反应如氯化锰。-20℃保存的粉剂建议溶解后分装保存，避免反复冻融。 6. 买了多个试剂盒，样本只有很少可以只用种提取液提取吗？
般同个系列的试剂盒中，酶活测定的提取液类似，含量测定的提取液类似。但具体的请具体查询。 7. 待测样本必须是鲜样的吗？冷冻样本是否可以用？
新鲜样本和冷冻样本都可用于大多数指标的测定，有些生理活性物质容易降解，建议用新鲜样本测定，如辅酶Ⅰ、辅酶Ⅱ、谷胱甘肽、线粒体复合体等。冷冻样本建议在-70℃或者液氮中保存。般样本在4度能都保存周，-20保存个月，-80保存3个月 8. 土壤酶活性测定可以用鲜土吗？
由于土壤颗粒大小不致导致水分含量不样，且取样量较少，为了保证测定的重复性，建议将鲜土风干并过筛后取样。若用鲜土测定，需保证样本的颗粒大小致水分含量相似，建议过40目筛后取样，且同时测定的样本要保持致，好不要组样本用风干土，组用鲜土，风干后的土样在-20保存1个月测定大部分酶活几乎不会有损失；某些土壤的成分如硝态氮、铵态氮等在风干过程中会发生显著变化，必须用新鲜样品进行分析。 9. 样本研磨的方法？
样本研磨我们般用到三种方法：
第种：将研钵置于冰盒上匀浆即冰浴匀浆，在匀浆的过程中注意匀浆器浸于冰中，防止因为摩擦引起的温度过高，提取液可以在匀浆过程中或者匀浆后加入。
第二种：用液氮匀浆，液氮研磨将样本洗净，尽量剪成小块，放入研钵中，加入液氮研磨，液氮挥散后尽快加入第二次液氮直至研磨成粉末状，避免其过程中反复冻融，同时要做好保护措施，防止冻伤手指。完成后将粉末收集到离心管中加入缓冲液。样本可以提称量号也可研磨完后称量。
第三种：使用匀浆机进行匀浆，将称好的组织放入离心管中，加入适量提取液，加入钢珠。并将模块提遇冷，按照机器指示进行操作。般的动物组织用该方法效果尚可，有些机器对植物组织的处理效果不好。 10. 测定是如何调零？
使用分光光度计的用户，用蒸馏水或相应的有机试剂直接调零。使用酶标仪的用户，可以在个孔里加入200μL的蒸馏水或去离子水，作为调零孔，也可不用调零，后续计算中会有空白孔。 11. 样本如何稀释或浓缩？
样本测定值若超出检测范围，可以将提取的上清液用提取液稀释后重新测定。般从高到低，按照2倍，5倍，10倍，20倍的顺序，选择个合适的稀释倍数。样本测定值若低于检测范围，可以提高样本浓度，如称取0.2g样本加入1mL提取液匀浆，相当于将样本浓缩2倍。 12. 如何保证测定温度？
（1）根据说明书中指定测定温度，提打开保温设备（如水浴锅），设到指定温度，在达到指定温度后，把冷藏的试剂转移到保温设备中保温10-30分钟以上，以保证反应开始，就在指定温度中进行。
（2）对于拥有酶标仪的用户，直接提预热，在达到设定温度后，可以直接把预热后的试剂，加入酶标板，然后开始反应。
（3）在保温设备（水浴锅和金属浴，好是者）进行。注意提对保温设备进行预热，达到设定温度后再进行反应。但是仅适用于能够终止的反应。
（4）对于瞬间完成的反应，或者对温度不敏感的反应，为了提高重复性，好在同温度下完成检测。例如打开空调，设定在室温，如25℃。 当然，所有控温设备，都要进行预热。 13. 试剂盒有哪些常见规格？
（1）50管的试剂盒，常量法试剂盒，用分光光度计检测。1mL的比色皿检测。
（2）100管的试剂盒，微量法试剂盒，用酶标仪（酶标板）或者分光光度计（0.25 mL比色皿）检测。 14. 试剂盒规格中是什么意思？
（1）50T/48S：50T指能够做50次测定，48S指可以测试48个样品。如果每个样品重复测定3次，那么只能测定16个样品。其中有2次测定用于空白管或者对照管。值得特别注意的是，50T/24S中由于每个样品测定都需要做对照，因此能够测定样品的数量仅为8个（假设做3次重复）
（2）100T/96S：100T指能够做100次测定，96S指可以测定96个样品，如果每个样品重复测定3次，那么只能测定32个样品。其中有4次测定用于空白管或者对照管。 注意由于瓶璧和移液器吸附等，通常要比理论测定次数少1~3次。其它规格的含义依次类推。值得特别注意的是，100T/48S中由于每个样品测定都需要做对照，因此能够测定样品的数量仅为16个（假设做3次重复）。 15. 常量法和微量法试剂盒能否通用？
同指标的常量法与微量法试剂盒不可以通用，因为两者测定体系不同。如果用户自行改变体系，公司不能保证测定质量。 16. 比色皿有哪些规格？
（1）常量比色皿，如1mL和3mL等，常量法试剂盒都是选用1mL体系，只能用1mL比色皿，不可以用更大体积的比色皿，否则试剂量不够，无法正常比色。如果用户需要，自行购买公司的1mL比色皿。
（2）微量比色皿，如0.25mL和0.5mL等，微量法试剂盒都是选用0.25mL比色皿。如果用户需要，自行购买公司的0.25mL比色皿。般客户都选择使用酶标仪（需要自备酶标板）。
（3）紫外波长检测需要石英比色皿，不可以用普通玻璃比色皿。
（4）不同规格的比色皿，其外观大小是致的，都是1cm光径（也有0.5cm光径的比色皿，不常见，也可以用，但是计算时要注意修改计算公式），其内容积差异在于壁的厚度。 17. UV板和普通酶标板有何区别？
（1）微量法般使用酶标板，当检测波长≥380nm时，用般的酶标板即可，价格便宜，次性使用当然也可以用UV板代替，只是有些浪费。当检测波长＜380nm时，须选用区别于般酶标板的UV酶标板。价格比普通的酶标板贵，但可用洗板机清洗，重复利用。货号YA0602 96孔UV紫外检测酶标板（未灭菌）
（2）终测定的反应液为有机试剂时（乙醚、丙酮、乙酰乙酯、四氢呋喃、甲苯、氯仿等有机试剂），避免使用聚苯乙烯材质的96孔板。 18. 为什么有些试剂盒不提供标准品？
（1）这个根据后酶活定义来决定的，能提供的尽量提供，有些酶活测定的试剂盒，这种酶本身就很难获得。
（2）有些检测对象本身就无法购买到标准品。 19. 试剂盒应该在多长时间内用完？
（1）为了保证测定质量，试剂盒开封后般应该在个月内用完。
（2）用户样品量大时，可以次订购，分批生产和发货。
（3）特别值得注意的是，出于试剂稳定性考虑，说明书特别标明现配现用的试剂，配制后应该短时间内用完（如2小时），绝对不可以过夜。
（4）为了用户方便，公司通常分装成几个试剂瓶中，用户可以根据实际测定需要，进行配制。 20. 按照说明书冷藏后出现沉淀的试剂还可以用吗？
可以。但是应该在常温中充分溶解后再用，以免试剂浓度变小，造成测定不可靠。 21. 试剂变色后还可以用吗？
不可以。建议用户注意避光保存，使用定要观察试剂颜色是否正常。 22. 可以改变说明书中加试剂顺序吗？
不可以，否则可能造成反应不能正常进行，导致测定失败。强烈建议加完试剂后立即混匀。 23. 加完试剂后是如何振荡混匀的？
使用分光光度计的用户，可以将反应液加在离心管里，通过手动混匀或用涡旋振荡器混匀后马上转移到比色皿中检测，也可以将试剂放在比色皿中，迅速换成0.2ml的移液枪混匀。使用酶标仪的用户，可以将酶标仪在测定开始设置个5钟的振荡程序。 24. 为什么吸光度特别高？
（1）现在分光光度计或者酶标仪，允许测定的吸光度有定的范围。
（2）吸光度特别高，导致吸光度变化不再符合朗伯比尔定律，同时灵敏度也会降低。
（3）吸光度特别高，可能因为样品提取液在该波长下有其它强烈吸收的物质，添加的底物浓度高，紫外波长下用的玻璃比色皿，或者普通酶标板，比色皿脏，者比色皿不透光面对着光源等。 25. 试剂盒中-20度保存的干粉溶解后如何保存？
建议溶解后分装冻存，防止反复冻融。试剂盒开封后建议2周内用完。 26. 标签上写着放4度保存，不小心放在了-20度，还能用吗？
般情况拿出来放4度，没有析出的情况下是可以使用的，但是有的试剂写着切记放-20度，这种情况下是不能使用的。所以建议客户收到产品后先详细的看下说明书。 27. 如何选择比色皿或者96孔板
波长小于380nm的为紫外光区，需要用石英比色皿或者96孔UV板检测；波长大于380nm的为可见光区，不论石英或者玻璃比色皿、96孔板均可检测。但若终测定的反应液为有机试剂时（乙醚、丙酮、乙酰乙酯、四氢呋喃、甲苯、氯仿等有机试剂），避免使用聚苯乙烯材质的96孔板。 28. 测定时间段的试剂盒的注意事项
（1）测定时间短：建议使用比色皿或者96孔板个个进行测量，加完所有试剂后快速混匀（使用微量比色皿定要将枪头插至比色皿底部进行混匀操作）进行测量，如测定多个样本可以在加完后个试剂后开始计时，混匀固定时间（10s、20s）再进行测量
（2）测定时间长（10min、30min）：微量法可以使用96孔板进行测量，可以使用排枪加入同样的试剂。测定的每列样本可以错开时间进行测量以保证数据的准确性，防止次测量过多样本使起始反应时间不同而导致数据不准确。 |
